Método de Gel-Clot para la detección de las endotoxinas bacterianas

El método de Gel-Clot tiene el objetivo de detectar las endotoxinas bacterianas, estas sustancias se encuentran en la membrana exterior de las bacterias gramnegativas. Asimismo, estos pirógenos (nombrados de este modo, ya que producen fiebre, shock y otros malestares) se hallan de manera frecuente en los productos farmacéuticos.  

Por otro lado, también se encuentra el ensayo LAL (Lisado de Amebocitos de Limulus), el cual forma parte de diversos métodos, como los Turbidimétricos, los Cromogénicos y los de Gel-Clot, este último permite que se coagulen las proteínas en caso de que haya presencia de endotoxinas. 

Método Gel-Clot: así detecta la presencia de endotoxinas

Cuando aparece un gel en el lisado, entonces quiere decir que las proteínas provocadas por las endotoxinas se están coagulando. Dicho lisado tiene varios tipos que son de diversas sensibilidades para proporcionar la mayor efectividad del ensayo LAL. 

El método Gel-Clot es el más utilizado cuando se trata del ensayo LAL, ya que está recomendado por la FDA (Administración de Alimentos y Medicamentos). 

Existen las dos siguientes formas de aplicar el método Gel-Clot.

• Método Gel-Clot cualitativo: cuando aparece el gel, entonces el resultado es positivo. 

• Método Gel-Clot semicuantitativo: la cantidad de gel que se forma es proporcional a la cantidad de endotoxinas.  

Métodos alternativos: Cromogénico y Turbidimétrico

Como ya se mencionó anteriormente, existen otros dos métodos para poder detectar las endotoxinas bacterianas, como es el caso del método Cromogénico y el método Turbidimétrico, ¿ya los conoces? Descubre en qué consisten. 

Método Cromogénico

Para que resulte efectivo, es fundamental añadir el reactivo, el cual tiene un color que permite identificar y cuantificar la cantidad de endotoxinas que se hallan en la muestra. Para este método, es común que se utilice el reactivo p-nitroanilina, el cual es incoloro hasta que entra en contacto con las endotoxinas de la bacteria. Mientras más amarilla sea la solución, entonces más endotoxinas hay.

Método Turbidimétrico

Funciona mediante la espectrofotometría; esta prueba adquiere turbidez para que sea posible identificar la presencia de las endotoxinas bacterianas. Esta solución es clara; sin embargo, mientras más marcada sea la turbidez de la solución, entonces mayor es la cantidad de endotoxinas. 

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Fuentes consultadas.

1. https://inis.iaea.org/search/search.aspx?orig_q=RN:39107615

2. http://scielo.sld.cu/pdf/vac/v21n3/vac06312.pdf