¿En qué consiste el proceso de cromatografía?

El proceso de cromatografía es de suma importancia en todas las ramas de la ciencia, ya que es el método más eficaz el cual permite que se lleve a cabo la separación, identificación y determinación de los componentes químicos en las mezclas que son complejas. 

A su vez, existen diversas técnicas de cromatografía cuyo principal objetivo sigue siendo el mismo: separar las sustancias. Estos procesos hacen uso de materiales que contienen propiedades físicas, las cuales posibilitan que, al momento de interactuar con las sustancias o mezclas, estas se descomponen para que se pueda analizar las propiedades que las constituyen. 

El proceso de cromatografía comprende las dos fases siguientes: 

• Fase estacionaria

En esta fase el material se mantiene dentro de la columna cromatográfica a la vez que retiene algún componente que forma parte de la muestra; su estado puede ser sólido o líquido y posee una gran área superficial. 

Cuando la fase es sólida, no hay mayor dificultad, puesto que la fase móvil se podrá mover sin problema alguno; sin embargo, cuando esta fase es líquida, corre el riesgo de ser arrastrada por la fase móvil.   

• Fase móvil

Los elementos utilizados como fase móvil suelen ser los líquidos (CL) y los gaseosos (CG); en el caso de los elementos gaseosos, es fundamental que la mezcla a separar igualmente sea gaseosa. 

Los componentes de la mezcla permanecen disueltos en una fase móvil, a su vez, se van desplazando a través de una fase estacionaria y lo hacen con diferente velocidad. Mientras más adecuada sea la elección de las fases, más efectiva será la separación de los solutos. 

Por otro lado, la retención de los solutos se efectúa en función de las características moleculares de cada compuesto. 

Técnicas para el proceso de cromatografía 

Como se mencionó anteriormente, existen diversas técnicas de separación de mezclas complejas, algunas de ellas son las siguientes:

• Cromatografía en papel

 Las interacciones que se generan entre el soluto y el papel, provocan que los compuestos se desplacen en velocidades distintas. La muestra contiene una pequeña mancha de la disolución, esta se aplica con un centímetro de distancia de la base, sobre una tira de papel cromatográfico. La muestra es absorbida por el papel. 

• Cromatografía de intercambio iónico

Este tipo de cromatografía es en columna y utiliza una fase estacionaria cuyas sustancias tienen componentes con carga eléctrica. Este tipo de técnica se emplea para separar aminoácidos, péptidos y proteínas, ya que son compuestos cargados. 

• Cromatografía de líquidos de alta resolución (HPLC)

Este tipo de cromatografía en columna se suele usar en bioquímica y química analítica. Los componentes permanecen menos tiempo en la fase estacionaria gracias a que la muestra es forzada a atravesar la columna (que forma parte de la fase estacionaria), mediante un líquido (que forma parte de la fase móvil) a una presión elevada. Este tipo de cromatografía tiene una fase normal y una fase de reversa. 

• Cromatografía de permeación en gel (GPC)

Se le conoce igualmente como “cromatografía de exclusión por tamaño”, ya que separa las moléculas según sea la dimensión que poseen. A su vez, a estas moléculas les cuesta salir del medio poroso en el que quedan cuando atraviesan la columna que forma parte de la fase estacionaria. Se ocupa sobre todo para establecer el peso molecular que tienen los polímeros. 

• Cromatografía de afinidad

Este tipo de cromatografía está basada en las interacciones no covalentes, es decir, que no comparte electrones, sino que comprende variaciones electromagnéticas más dispersas entre la muestra y las moléculas específicas. A pesar de su especificidad, no es muy consistente; esta suele usarse para la purificación de proteínas, en el área bioquímica. 

• Cromatografía gas – líquido 

Lo que caracteriza a este tipo de cromatografía, es que su fase estacionaria es líquida y su fase móvil es gaseosa y lo que la fundamenta es el equilibrio entre ambas fases. Esta técnica es eficaz cuando se trata de las mezclas no polares; sin embargo, no es de gran utilidad para las moléculas termolábiles. 

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Fuentes consultadas. 

1. https://ri.conicet.gov.ar/bitstream/handle/11336/75465/CONICET_Digital_Nro.3655a360-b03b-44c8-8519-bc747d073f7c_A.pdf?Sequence=2&isallowed=y 

2. https://www.ub.edu/oblq/oblq%20castellano/cromatografia_altres.html